安徽人手微生物分析方法验证第三方机构「多图」

抑菌效力

取包装完好的供试品5份，取适量供试品分别转移至5个适宜的无菌容器中，每一容器接种一种试验菌，蛋白琥珀酸铁为3类供试品，3类供试品中1g或1ml接种菌量为105～106cfu，接种菌液的体积不得超过供试品体积的0.5%～1%，充分混合，使供试品中的试验菌均匀分布。大肠菌群检验呈阳性，并怀疑食品可能受到致病菌污染时可进行致病菌检验。然后将接种的供试品在试验期间置20～25℃，避光贮存，贮存温度的变化应尽可能控制在小范围，并防止被污染。

微生物限度检查

（4）需用特殊方法制备供试液的供试品

  膜剂供试品 取供试品，剪碎，加pH7.0无菌氯化钠-蛋白胨缓冲液，或pH7.2磷酸盐缓冲液，或胰酪大豆胨液体培养基，浸泡，振摇，制成1：10的供试液。若需要，调节供试液pH值至6～8。必要时，用同一稀释液将供试液进一步10倍系列稀释。

  肠溶及结肠溶制剂供试品 取供试品，加入pH6.8无菌磷酸盐缓冲液（用于肠溶制剂）或pH7.6 无菌磷酸盐缓冲液（用于结肠溶制剂），置45℃水浴中，振摇，使溶解，制成1：10的供试液。必要时，用同一稀释液将供试液进一步10倍系列稀释。

  气雾剂、喷雾剂供试品 取供试品，置-20℃或其他适宜温度冷冻约1小时，取出，迅速消毒供试品开启部位，用无菌钢锥在该部位钻一小孔，放至室温，并轻轻转动容器，使抛射剂缓缓全部释出。3、v-p试验某些细菌在葡萄糖蛋白胨水培养基中能分解葡萄糖产生丙酸，丙酸缩合，脱羧成乙酰，后者在强碱环境下，被空气中氧氧化为二乙酰，二乙酰与蛋白胨中的胍基生成红色化合物，称v－p(+)反应。供试品亦可采用其他适宜的方法取出。用无菌zhu射器从每一容器中吸出药液于无菌容器中混合，然后取样检查。

  贴膏剂供试品 取供试品，去掉防粘层，将粘贴面朝上放置在无菌玻璃或塑料器皿上，在粘贴面上覆盖一层适宜的无菌多孔材料（如无菌纱布），避免贴膏剂粘贴在一起。2、细菌细胞在固体培养基表面形成的细胞群体叫菌落(colony)。将处理后的贴膏剂放入盛有适宜体积并含有表面活性剂（如聚山梨酯80或卵磷脂）稀释液的容器中，振荡至少30分钟。必要时，用同一稀释液将供试液进一步10倍系列稀释。

   3.MPN 法

   取规定量供试品，按方法适用性试验确认的方法进行供试液制备和供试品接种，所有试验管在30～35℃培养3～5天，如果需要确认是否有微生物生长，按方法适用性试验确定的方法进行。供试品检查时，如果使用了表面活性剂、中和剂或灭活剂，应证明其有效性及对微生物***性。记录每一稀释级微生物生长的管数，从表3査每1g 或1ml供试品中需氧菌总数的可能数。

   结果判断

   需氧菌总数是指胰酪大豆胨琼脂培养基上生长的总菌落数（包括真菌菌落数）；在我国现有的***中，致病菌一般指"肠道致病菌和致病性球菌"，主要包括沙门氏菌、志贺氏菌、金黄色葡萄qiu菌、致病性链球菌等四种，致病菌不允许在食品中检出。霉菌和酵母菌总数是指沙氏葡萄糖琼脂培养基上生长的总菌落数（包括细菌菌落数）。若因沙氏葡萄糖琼脂培养基上生长的细菌使霉菌和酵母菌的计数结果不符合微生物限度要求，可使用含kang生素（如氯霉su、庆大霉su）的沙氏葡萄糖琼脂培养基或其他选择性培养基（如玫瑰红钠琼脂培养基）进行霉菌和酵母菌总数测定。使用选择性培养基时，应进行培养基适用性检查。若采用MPN法，测定结果为需氧菌总数。

供试品中微生物的回收

……涂布法“取15~20ml”修订为“取适量（通常为15~20ml）”。……(2)薄膜过滤法薄膜过滤法所采用的滤膜孔径应不大于0.45jLtm，直径一般为50mm,若采用其他直径的滤膜，冲洗量应进行相应的调整。供试品及其溶剂应不影响滤膜材质对微生物的截留。滤器及滤膜使用前应采用适宜的方法灭菌。使用时，应保证滤膜在过滤前后的完整性。如果在一个菌落中所有细胞均来自于一个亲代细胞，那么这个菌落称为纯培养(pureculture)。

学习：这个“完整性”应该类似生产过程所用的滤膜的完整性，不同的是“保证”的方法是滤器验收、厂家报告单、使用中外观检查等；必要时应该进行适当方式的完整性检测。