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{微生物}培养

——微生物培养——

指将微生物接种到培养基内，经一定条件使微生物生长繁殖。接种的方法有 6种。①涂布法:将纯菌或含菌材料均匀地涂布在固体培养基表面。②划线法:用接种环沾取含菌材料，在固体培养基表面划线。③倾注法:取少许含菌材料放入无菌培养皿中，然后倾入已融化并已冷却至48℃左右的琼脂灭菌培养基，摇匀后冷却凝固。食品安全防控历史证明，随着社会发展，法律法规不断完善，在解决或基本解决食品添加剂的添加之后，食源病原微生物引发的食品安全问题就更加突出。④点植法:用接种针在固体培养基表面接触几点。⑤穿刺法:用接种针沾取的微生物经穿刺而进入半固体深层培养基中。⑥浸洗法:用接种针挑取含菌材料，在液体培养基中洗下。培养方法则根据微生物对氧的要求情况分为需氧和厌氧两种。需氧培养是指必须在有氧环境中进行培养，必要时用振荡或通气搅拌达到充分供氧;厌氧培养是培养过程一直保持在少氧或无氧的环境中。厌氧的方法可用物理、化学、生物等办法使培养容器内的氧气部分或全部消除。通常用抽真空方法，有时将两种方法结合使用，使厌氧培养更为理想。接种、培养是食品微生物应用、研究过程中基本和***的方法。

抑菌效力-培养基

培养基的制备

1.胰酪大豆胨液体培养基

 胰酪胨17.0克

氯化钠5.0克

大豆木瓜蛋白酶消化物3.0克

磷酸氢二钾2.5克

葡萄糖（一水合）2.5克

水1000mL

除葡萄糖外，取上述成分，混合，微温溶解，滤过，调节 pH 值使灭菌后在 25℃的 pH 值为 7.3±0.2，加入葡萄糖，分装，灭菌。

胰酪大豆胨液体培养基置 20～25℃培养。

2. 胰酪大豆胨琼脂培养基

胰酪胨15.0克

大豆木瓜蛋白酶水解物5.0克

琼脂15.0克

水1000ml

除琼脂外，取上述成分，混合。微温溶解，调节 pH 值使灭菌后在 25℃的 pH 值为 7.3±0.2，加入琼脂，加热溶化后，摇匀，分装，灭菌。

3.沙氏葡萄糖液体培养基

沙氏葡萄糖琼脂培养基照微生物限度检查法（附录ⅩⅢ C）制备。

菌落总数测定注意事项

1.选取样品要有代表性，如为固体样品要多采几个部位，液体检样要混匀。

2.每次做样从开始到结束都要进行超净台空气净度的监测，同时对所有灭菌物品做空白对照。

3.为减少稀释倍数的误差，在做连续递增稀释时，每一稀释液应充分振摇使其均匀，同时每一稀释度换一支吸管。

4.在进行连续稀释时，应将吸管内液体沿壁流入，勿使吸管触及稀释液。

5.倾倒营养琼脂培养基平板时，温度要在46±1℃之间，数量要在15ml左右为宜，不要太多太少。

6.培养物48h培养后培养基失重不超过15%，培养箱内要放水。

7.样加入平皿后应立即倾注培养基并旋转混匀，一般从稀释到倾注不超过20分钟。

8.平皿内如有链状菌落生长时：菌落之间无明显界限且仅有一条链可视为一个菌落，如为不同来源的几条链则将每条链各做一个菌落记。

9.做菌落记数时平板里所有的菌落都要记数。