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{微生物检测}{微生物限度}

——微生物限度检验量——

检验量检验量即一次试验所用的供试品量(g、ml 或c㎡)。

除另有规定外，一般供试品的检验量为10g 或10ml;膜剂为100c㎡;贵重药品、微量包装药品的检验量可以酌减。要求检查沙门菌的供试品，其检验量应增加20g 或20ml(其中10g或者10ml 用于阳性对照试验)。

检验时，应从2 个以上xiao包装单位中抽取供试品，大蜜丸还不得少于4丸，膜剂还不得少于4 片。

一般应随机抽取不少于检验用量(两个以上xiao包装单位)的3 倍量供试品。

微生物限度检查

计数方法适用性试验

   1.供试液制备

   根据供试品的理化特性与生物学特性，采取适宜的方法制备供试液。供试液制备若需加温时，应均匀加热，且温度不应超过45℃。供试液从制备至加入检验用培养基，不得超过1 小时。

   常用的供试液制备方法如下。如果下列供试液制备方法经确认均不适用，应建立其他适宜的方法。

   （1）水溶性供试品 取供试品，用pH7.0无菌氯化钠-蛋白胨缓冲液，或pH7.2磷酸盐缓冲液，或胰酪大豆胨液体培养基溶解或稀释制成1：10供试液。若需要，调节供试液pH值至6～8。微生物保存基本原理是在挑选优良纯培养物并使其处于休眠状态基础上，人为地创造一个有利于休眠的环境，使其长期保存后仍能保持zhong原有的优良特性。必要时，用同一稀释液将供试液进一步10倍系列稀释。水溶性液体制剂也可用混合的供试品原液作为供试液。

   （2）水不溶性非油脂类供试品 取供试品，用pH7.0无菌氯化钠-蛋白胨缓冲液，或pH7.2磷酸盐缓冲液，或胰酪大豆胨液体培养基制备成1：10供试液。分散力较差的供试品，可在稀释液中加入表面活性剂如0.1%的聚山梨酯80，使供试品分散均匀。保藏方法：1、定期移植法亦称传代培养保藏法，指将junzhong接种于适宜的斜面培养基上，***适条件下培养，完成培养于4～6℃进行保存并间隔一定时间(3-6个月)进行移植培养的一种短期种保藏方法。若需要，调节供试液pH值至6～8。必要时，用同一稀释液将供试液进一步10倍系列稀释。

   （3）油脂类供试品 取供试品，加入无菌十四烷酸异丙酯使溶解，或与zui少量并能使供试品乳化的无菌聚山梨酯80或其他无抑菌性的无菌表面活性剂充分混匀。表面活性剂的温度一般不超过40℃（特殊情况下，zui多不超过45℃），小心混合，若需要可在水浴中进行，然后加入预热的稀释液使成1：10供试液，保温，混合，并在zui短时间内形成乳状液。6、单细胞(或单孢子)分离法是采取显微分离法从混杂群体中直接分离单个细胞或单个个体进行培养以获得纯培养。必要时，用稀释液或含上述表面活性剂的稀释液进一步10倍系列稀释。

2.接种和稀释

   按下列要求进行供试液的接种和稀释，制备微生物回收试验用供试液。所加菌液的体积应不超过供试液体积的1%。为确认供试品中的微生物能被充分检出，首先应选择zui低稀释级的供试液进行计数方法适用性试验。

   （1）试验组 取上述制备好的供试液，加入试验菌液，混匀，使每1ml供试液或每张滤膜所滤过的供试液中含菌量不大于100cfu。

   （2）供试品对照组 取制备好的供试液，以稀释液代替菌液同试验组操作。

   （3）菌液对照组取 不含中和剂及灭活剂的相应稀释液替代供试液，按试验组操作加入试验菌液并进行微生物回收试验。

   若因供试品抗jun活性或溶解性较差的原因导致无法选择zui低稀释级的供试液进行方法适用性试验时，应采用适宜的方法对供试液进行进一步的处理。5、涂布接种与浇混接种略有不同，就是先倒好平板，让其凝固，然后再将菌液倒入平板上面，迅速用涂布棒在表面作来回左右的涂布，让菌液均匀分布，就可长出单个的微生物的菌落。如果供试品对微生物生长的抑制作用无法以其他方法消除，供试液可经过中和、稀释或薄膜过滤处理后再加入试验菌悬液进行方法适用性试验。