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{微生物检测}微生物分离纯化

含有一种以上的微生物培养物称为混和培养物(mixed culture)。如果在一个菌落中所有细胞均来自于一个亲代细胞，那么这个菌落称为纯培养(pureculture)。在进行junzhong鉴定时，所用的微生物一般均要求为纯的培养物。此法即把少量的微生物接种在平板表面上，成等边三角形的三点，让它各自独立形成菌落后，来观察、研究它们的形态。得到纯培养的过程称为分离纯化，方法有许多种。

1、倾注平板法

首先把微生物悬液通过一系列稀释，取一定量的稀释液与熔化好的保持在40-50℃左右的营养琼脂培养基充分混合，然后把这混合液倾注到无菌的培养皿中，待凝固之后，把这平板倒置在恒箱中培养。单一细胞经过多次增殖后形成一个菌落，取单个菌落制成悬液，重复上述步骤数次，便可得到纯培养物。3、穿刺接种在保藏yanyangjunzhong或研究微生物的动力时常采用此法。

2、涂布平板法

首先把微生物悬液通过适当的稀释，取一定量的稀释液放在无菌的已经凝固的营养琼脂平板上，然后用无菌的玻璃guadao把稀释液均匀地涂布在培养基表面上，经恒温培养便可以得到单个菌落。

3、平板划线法

zui简单的分离微生物的方法是平板划线法。用无菌的接种环取培养物少许在平板上进行划线。划线的方法很多，常见的比较容易出现单个菌落的划线方法有斜线法、曲线法、方格法、fangshe法、四格法等。(1)接种灭菌(2)开启棉塞(3)管口灭菌(4)挑起菌苔(5)接种(6)塞好棉塞。当接种环在培养基表面上往后移动时，接种环上的菌液逐渐稀释，后在所划的线上分散着单个细胞，经培养，每一个细胞长成一个菌落。

微生物限度检查

计数方法适用性试验

   1.供试液制备

   根据供试品的理化特性与生物学特性，采取适宜的方法制备供试液。供试液制备若需加温时，应均匀加热，且温度不应超过45℃。供试液从制备至加入检验用培养基，不得超过1 小时。

   常用的供试液制备方法如下。如果下列供试液制备方法经确认均不适用，应建立其他适宜的方法。

   （1）水溶性供试品 取供试品，用pH7.0无菌氯化钠-蛋白胨缓冲液，或pH7.2磷酸盐缓冲液，或胰酪大豆胨液体培养基溶解或稀释制成1：10供试液。若需要，调节供试液pH值至6～8。必要时，用同一稀释液将供试液进一步10倍系列稀释。2、涂布平板法首先把微生物悬液通过适当的稀释，取一定量的稀释液放在无菌的已经凝固的营养琼脂平板上，然后用无菌的玻璃guadao把稀释液均匀地涂布在培养基表面上，经恒温培养便可以得到单个菌落。水溶性液体制剂也可用混合的供试品原液作为供试液。

   （2）水不溶性非油脂类供试品 取供试品，用pH7.0无菌氯化钠-蛋白胨缓冲液，或pH7.2磷酸盐缓冲液，或胰酪大豆胨液体培养基制备成1：10供试液。分散力较差的供试品，可在稀释液中加入表面活性剂如0.1%的聚山梨酯80，使供试品分散均匀。若需要，调节供试液pH值至6～8。除另有规定外，本检查法中细菌及控制菌培养温度为30℃~35℃。必要时，用同一稀释液将供试液进一步10倍系列稀释。

   （3）油脂类供试品 取供试品，加入无菌十四烷酸异丙酯使溶解，或与zui少量并能使供试品乳化的无菌聚山梨酯80或其他无抑菌性的无菌表面活性剂充分混匀。表面活性剂的温度一般不超过40℃（特殊情况下，zui多不超过45℃），小心混合，若需要可在水浴中进行，然后加入预热的稀释液使成1：10供试液，保温，混合，并在zui短时间内形成乳状液。必要时，用稀释液或含上述表面活性剂的稀释液进一步10倍系列稀释。大肠菌群检验呈阳性，并怀疑食品可能受到致病菌污染时可进行致病菌检验。

   各品种项下规定的微生物限度标准解释如下：

   10^1cfu：可接受的zui大菌数为20；

   10^2cfu：可接受的zui大菌数为200；

   10^3cfu：可接受的zui大菌数为2000，依此类推。

   若供试品的需氧菌总数、霉菌和酵母菌总数的检查结果均符合该品种项下的规定，判供试品符合规定；若其中任何一项不符合该品种项下的规定，判供试品不符合规定。

   稀释液、冲洗液及培养基

   见非无菌产品微生物限度检查：控制菌检查法（通则1106）。

非无菌药品微生物限度标准

非无菌药品微生物限度标准

   非无菌药品的微生物限度标准是基于药品的给药途径和对患者健康潜在的危害以及药品的特殊性而制订的。微生物保存基本原理是在挑选优良纯培养物并使其处于休眠状态基础上，人为地创造一个有利于休眠的环境，使其长期保存后仍能保持zhong原有的优良特性。药品生产、贮存、销售过程中的检验，药用原料、辅料及中药提取物的检验，新药标准制订，进kou药品标准复核，考察药品质量及仲裁等，除另有规定外，其微生物限度均以本标准为依据。

   1.制剂通则、品种项下要求无菌的及标示无菌的制剂和原辅料

   应符合无菌检查法规定。

   2.用于手术、严重烧shang、严重创伤的局部给药制剂

   3.非无菌化学药品制剂、生物制品制剂、不含药材原粉的中药制剂的微生物限度标准见表1。