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{微生物检测}

——食品微生物项目背景 —— 

食源病原微生物引起的食源性疾病是食品安全的***问题。40-2010食品安全标准食品微生物学检验阪崎肠gan菌检验GB4789。食源病原微生物可通过接触物表面、水、土壤、空气、排泄物、食物等媒介传播，从而污染“从农田到餐桌”的食物链任何环节。由于其种类繁多、来源广泛、危害巨大，并具有群爆发、宿主范围广、传播速度快和社会影响强烈、控制难度大等特点，是引发食品安全危害的重要因素，严重时会危及人类健康甚至社会安定，造成巨大经济损失。食品安全防控历史证明，随着社会发展，法律法规不断完善，在解决或基本解决食品添加剂的添加之后，食源病原微生物引发的食品安全问题就更加突出。

微生物限度检查

2.接种和稀释

   按下列要求进行供试液的接种和稀释，制备微生物回收试验用供试液。所加菌液的体积应不超过供试液体积的1%。为确认供试品中的微生物能被充分检出，首先应选择zui低稀释级的供试液进行计数方法适用性试验。

   （1）试验组 取上述制备好的供试液，加入试验菌液，混匀，使每1ml供试液或每张滤膜所滤过的供试液中含菌量不大于100cfu。

   （2）供试品对照组 取制备好的供试液，以稀释液代替菌液同试验组操作。

   （3）菌液对照组取 不含中和剂及灭活剂的相应稀释液替代供试液，按试验组操作加入试验菌液并进行微生物回收试验。

   若因供试品抗jun活性或溶解性较差的原因导致无法选择zui低稀释级的供试液进行方法适用性试验时，应采用适宜的方法对供试液进行进一步的处理。——食品微生物项目背景——食源病原微生物引起的食源性疾病是食品安全的***问题。如果供试品对微生物生长的抑制作用无法以其他方法消除，供试液可经过中和、稀释或薄膜过滤处理后再加入试验菌悬液进行方法适用性试验。

   3.抗jun活性的去除或灭活

   供试液接种后，按下列“微生物回收” 规定的方法进行微生物计数。若试验组菌落数减去供试品对照组菌落数的值小于菌液对照组菌落数值的50%，可采用下述方法消除供试品的抑菌活性。

   （1）增加稀释液或培养基体积。

   （2）加入适宜的中和剂或灭活剂。

   中和剂或灭活剂（表2）可用于消除干扰物的抑菌活性，zui好在稀释液或培养基灭菌前加入。液体培养：在实验中，通过液体培养可以使微生物迅速繁殖，获得大量的培养物，在一定条件下，还是微生物选择增菌的有效方法。若使用中和剂或灭活剂，试验中应设中和剂或灭活剂对照组，即取相应量稀释液替代供试品同试验组操作，以确认其有效性和对微生物***性。中和剂或灭活剂对照组的菌落数与菌液对照组的菌落数的比值应在0.5～2 范围内。

   （3）采用薄膜过滤法。

   （4）上述几种方法的联合使用。

   若没有适宜消除供试品抑菌活性的方法，对特定试验菌回收的失败，表明供试品对该试验菌具有较强抗jun活性，同时也表明供试品不易被该类微生物污染。保藏方法：1、定期移植法亦称传代培养保藏法，指将junzhong接种于适宜的斜面培养基上，***适条件下培养，完成培养于4～6℃进行保存并间隔一定时间(3-6个月)进行移植培养的一种短期种保藏方法。但是，供试品也可能仅对特定试验菌株具有抑制作用，而对其他菌株没有抑制作用。因此，根据供试品须符合的微生物限度标准和菌数报告规则，在不影响检验结果判断的前提下，应采用能使微生物生长的更高稀释级的供试液进行计数方法适用性试验。若方法适用性试验符合要求，应以该稀释级供试液作为zui低稀释级的供试液进行供试品检查。

1.平皿法

   平皿法包括倾注法和涂布法。除另有规定外，取规定量供试品，按方法适用性试验确认的方法进行供试液制备和菌数测定，每稀释级每种培养基至少制备2个平板。

   培养和计数 除另有规定外，胰酪大豆胨琼脂培养基平板在30～35℃培养3～5天，沙氏葡萄糖琼脂培养基平板在20～25℃培养5～7天，观察菌落生长情况，点计平板上生长的所有菌落数，计数并报告。三角烧瓶液体培养多数是通过摇床振荡，使外界的空气源源不断地进入瓶中。菌落蔓延生长成片的平板不宜计数。点计菌落数后，计算各稀释级供试液的平均菌落数，按菌数报告规则报告菌数。若同稀释级两个平板的菌落数平均值不小于15，则两个平板的菌落数不能相差1倍或以上。

   菌数报告规则 需氧菌总数测定宜选取平均菌落数小于300cfu的稀释级、霉菌和酵母菌总数测定宜选取平均菌落数小于100cfu的稀释级，作为菌数报告的依据。在我国现有的***中，致病菌一般指"肠道致病菌和致病性球菌"，主要包括沙门氏菌、志贺氏菌、金黄色葡萄qiu菌、致病性链球菌等四种，致病菌不允许在食品中检出。取zui高的平均菌落数，计算1g、1ml或10c㎡供试品中所含的微生物数，取两位有效数字报告。

   如各稀释级的平板均无菌落生长，或仅zui低稀释级的平板有菌落生长，但平均菌落数小于1 时，以<1 乘以zui低稀释倍数的值报告菌数。