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{微生物}培养

——微生物培养——

指将微生物接种到培养基内，经一定条件使微生物生长繁殖。接种的方法有 6种。①涂布法:将纯菌或含菌材料均匀地涂布在固体培养基表面。②划线法:用接种环沾取含菌材料，在固体培养基表面划线。③倾注法:取少许含菌材料放入无菌培养皿中，然后倾入已融化并已冷却至48℃左右的琼脂灭菌培养基，摇匀后冷却凝固。④点植法:用接种针在固体培养基表面接触几点。⑤穿刺法:用接种针沾取的微生物经穿刺而进入半固体深层培养基中。⑥浸洗法:用接种针挑取含菌材料，在液体培养基中洗下。培养方法则根据微生物对氧的要求情况分为需氧和厌氧两种。需氧培养是指必须在有氧环境中进行培养，必要时用振荡或通气搅拌达到充分供氧;厌氧培养是培养过程一直保持在少氧或无氧的环境中。厌氧的方法可用物理、化学、生物等办法使培养容器内的氧气部分或全部消除。注：有所接种必须无菌操作培养基经高压灭菌后，用经过灭菌的工具(如接种针和吸管等)在无菌条件下接种含菌材料(如样品、菌苔或菌悬液等)于培养基上，这个过程叫做无菌接种操作。通常用抽真空方法，有时将两种方法结合使用，使厌氧培养更为理想。接种、培养是食品微生物应用、研究过程中基本和***的方法。

抑菌效力

适用性检查 取大肠埃希菌、金黄色球菌、铜绿假单胞菌各50～100cfu,分别注入无菌平皿中，立即倾注胰酪胨大豆琼脂培养基，每株试验菌平行制备2个平皿，混匀，凝固，置30～35℃培养48小时，计数；取白色nian珠菌、黑曲霉各50～100cfu，分别注入无菌平皿中，立即倾注沙氏葡萄糖琼脂培养基，每株试验菌平行制备2个平皿，混匀，凝固，置20～25℃培养72小时，计数；需氧培养是指必须在有氧环境中进行培养，必要时用振荡或通气搅拌达到充分供氧。同时，用对应的对照培养基替代被检培养基进行上述试验。

微生物计数

1.血细胞计数法

将稀释的菌液样品滴在血细胞计数板上，在显微镜下计算4~5个中格的细菌数，并求出每个小格所含细菌的平均数，再以此为依据，估算总菌数。

①此法的缺点是不能区分死菌和活菌。

②对压在小方格界线上的细菌，应当取平均值计数。

③此法可用于测定培养液中酵母jun种群数量的变化

2.稀释涂布平板法

原理:每个活细菌在适宜的培养基和良好的生长条件下可以通过生长形成菌落。培养基表面生长的一个菌落，来源于样品稀释液中的一个活菌。

①这一方法常用来统计样品中活菌的数目

②统计的菌落数往往比活菌的实际数目低，原因是当两个活多个细胞连在一起时，平板上观察到的只是一个菌落。因此统计结果一般用菌落数而不是用活菌数来表示。

③土壤、水、牛奶、食品和其他材料中所含细菌、酵母、芽孢与孢子等的数量均可用此法测定。但不适于测定样品中丝状体微生物，例如放线jun或丝状真菌或丝状蓝细菌等的营养体等。

④此法若不培养成菌落，可通过将一定量的菌液均匀地涂布在玻片上的一定面积上，经固定染色后在显微镜下计数，这样又称涂片计数法。染色可用台盼蓝，台盼蓝能使死细胞染成蓝色，可分别计数死细胞和huo细胞。