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{微生物检测}微生物培养

培养

1、根据培养时是否需要氧气，可分为好氧培养和厌氧培养两大类。

好氧培养：也称“好气培养”。就是说这种微生物在培养时，需要有氧气加入，否则就不能生长良好。在实验室中，斜面培养是通过棉花塞从外界获得无菌的空气。三角烧瓶液体培养多数是通过摇床振荡，使外界的空气源源不断地进入瓶中。

厌氧培养：也称“厌气培养”。这类微生物在培养时，不需要氧气参加。在厌氧微生物的培养过程中，zui重要的一点就是要除去培养基中的氧气。

2、根据培养基的物理状态，可分为固体培养和液体培养两大类。

固质培养：是将jun种接至疏松而富有营养的固体培养基中，在合适的条件下进行微生物培养的方法。

液体培养：在实验中，通过液体培养可以使微生物迅速繁殖，获得大量的培养物，在一定条件下，还是微生物选择增菌的有效方法。

   3.抗jun活性的去除或灭活

   供试液接种后，按下列“微生物回收” 规定的方法进行微生物计数。若试验组菌落数减去供试品对照组菌落数的值小于菌液对照组菌落数值的50%，可采用下述方法消除供试品的抑菌活性。

   （1）增加稀释液或培养基体积。

   （2）加入适宜的中和剂或灭活剂。

   中和剂或灭活剂（表2）可用于消除干扰物的抑菌活性，zui好在稀释液或培养基灭菌前加入。若使用中和剂或灭活剂，试验中应设中和剂或灭活剂对照组，即取相应量稀释液替代供试品同试验组操作，以确认其有效性和对微生物***性。中和剂或灭活剂对照组的菌落数与菌液对照组的菌落数的比值应在0.5～2 范围内。10-2010食品安全标准食品微生物学检验金黄色葡萄qiu菌检验GB4789。

   （3）采用薄膜过滤法。

   （4）上述几种方法的联合使用。

   若没有适宜消除供试品抑菌活性的方法，对特定试验菌回收的失败，表明供试品对该试验菌具有较强抗jun活性，同时也表明供试品不易被该类微生物污染。但是，供试品也可能仅对特定试验菌株具有抑制作用，而对其他菌株没有抑制作用。因此，根据供试品须符合的微生物限度标准和菌数报告规则，在不影响检验结果判断的前提下，应采用能使微生物生长的更高稀释级的供试液进行计数方法适用性试验。若方法适用性试验符合要求，应以该稀释级供试液作为zui低稀释级的供试液进行供试品检查。3、v-p试验某些细菌在葡萄糖蛋白胨水培养基中能分解葡萄糖产生丙酸，丙酸缩合，脱羧成乙酰，后者在强碱环境下，被空气中氧氧化为二乙酰，二乙酰与蛋白胨中的胍基生成红色化合物，称v－p(+)反应。

微生物限度检查

4.供试品中微生物的回收

    微生物的回收可采用平皿法、薄膜过滤法或MPN法。

   （1）平皿法 平皿法包括倾注法和涂布法。表1中每株试验菌每种培养基至少制备2个平皿，以算术均值作为计数结果。

   倾注法 取照上述“供试液的制备” “接种和稀释”和“抗jun活性的去除或灭活” 制备的供试液1ml，置直径90mm的无菌平皿中，注入15～20ml温度不超过45℃熔化的胰酪大豆胨琼脂或沙氏葡萄糖琼脂培养基，混匀，凝固，倒置培养。若使用直径较大的平皿，培养基的用量应相应增加。按表1规定条件培养、计数。同法测定供试品对照组及菌液对照组菌数。计算各试验组的平均菌落数。供试品检查时，如果使用了表面活性剂、中和剂或灭活剂，应证明其有效性及对微生物***性。

   涂布法 取15～20ml温度不超过45℃的胰酪大豆胨琼脂或沙氏葡萄糖琼脂培养基，注入直径90mm的无菌平皿，凝固，制成平板，采用适宜的方法使培养基表面干燥。若使用直径较大的平皿，培养基用量也应相应增加。每一平板表面接种上述照“供试液的制备” “接种和稀释” 和“抗jun活性的去除或灭活”制备的供试液不少于0.1ml。按表1规定条件培养、计数。同法测定供试品对照组及菌液对照组菌数。计算各试验组的平均菌落数。通常用抽真空方法，有时将两种方法结合使用，使厌氧培养更为理想。