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{微生物检测}常规鉴定技术

{微生物检测}常规鉴定技术一

(一)形态结构和培养特性观察

1、微生物的形态结构观察主要是通过染色，在显微镜下对其形状、大小、排列方式、细胞结构(包括细胞壁、细胞膜、细胞核、鞭毛、芽孢等)及染色特性进行观察，直观地了解细菌在形态结构上特性，根据不同微生物在形态结构上的不同达到区别、鉴定微生物的目的。——微生物限度检验量——检验量检验量即一次试验所用的供试品量(g、ml或c㎡)。

2、细菌细胞在固体培养基表面形成的细胞群体叫菌落(colony)。不同微生物在某种培养基中生长繁殖，所形成的菌落特征有很大差异，而同一种的细菌在一定条件下，培养特征却有一定稳定性。如海产品以副溶血性弧菌作为参考菌群，蛋与蛋制品以沙门氏菌菌、金黄色葡萄qiu菌、变形gan菌等作为参考菌群，米、面类食品以蜡样芽孢gan菌、变形gan菌、霉菌等作为参考菌群，罐头食品以耐热性芽孢菌作为参考菌群等。以此可以对不同微生物加以区别鉴定。因此，微生物培养特性的观察也是微生物检验鉴别中的一项重要内容。

微生物限度检查

2.接种和稀释

   按下列要求进行供试液的接种和稀释，制备微生物回收试验用供试液。所加菌液的体积应不超过供试液体积的1%。为确认供试品中的微生物能被充分检出，首先应选择zui低稀释级的供试液进行计数方法适用性试验。

   （1）试验组 取上述制备好的供试液，加入试验菌液，混匀，使每1ml供试液或每张滤膜所滤过的供试液中含菌量不大于100cfu。

   （2）供试品对照组 取制备好的供试液，以稀释液代替菌液同试验组操作。

   （3）菌液对照组取 不含中和剂及灭活剂的相应稀释液替代供试液，按试验组操作加入试验菌液并进行微生物回收试验。

   若因供试品抗jun活性或溶解性较差的原因导致无法选择zui低稀释级的供试液进行方法适用性试验时，应采用适宜的方法对供试液进行进一步的处理。3、穿刺接种在保藏yanyangjunzhong或研究微生物的动力时常采用此法。如果供试品对微生物生长的抑制作用无法以其他方法消除，供试液可经过中和、稀释或薄膜过滤处理后再加入试验菌悬液进行方法适用性试验。

4.供试品中微生物的回收

    微生物的回收可采用平皿法、薄膜过滤法或MPN法。

   （1）平皿法 平皿法包括倾注法和涂布法。表1中每株试验菌每种培养基至少制备2个平皿，以算术均值作为计数结果。

   倾注法 取照上述“供试液的制备” “接种和稀释”和“抗jun活性的去除或灭活” 制备的供试液1ml，置直径90mm的无菌平皿中，注入15～20ml温度不超过45℃熔化的胰酪大豆胨琼脂或沙氏葡萄糖琼脂培养基，混匀，凝固，倒置培养。若使用直径较大的平皿，培养基的用量应相应增加。食品微生物与人类关系紧密，对食品微生物的了解、利用、和防治在很早以前就有很大的进展了。按表1规定条件培养、计数。同法测定供试品对照组及菌液对照组菌数。计算各试验组的平均菌落数。

   涂布法 取15～20ml温度不超过45℃的胰酪大豆胨琼脂或沙氏葡萄糖琼脂培养基，注入直径90mm的无菌平皿，凝固，制成平板，采用适宜的方法使培养基表面干燥。若使用直径较大的平皿，培养基用量也应相应增加。15-2010食品安全标准食品微生物学检验霉菌和酵母计数GB4789。每一平板表面接种上述照“供试液的制备” “接种和稀释” 和“抗jun活性的去除或灭活”制备的供试液不少于0.1ml。按表1规定条件培养、计数。同法测定供试品对照组及菌液对照组菌数。计算各试验组的平均菌落数。

大肠菌群注意事项

1.对乳糖胆盐管产气的观察只要有气泡往上冒就算产气。

2.在伊红美兰琼脂平板上挑取菌落时一定要选典型菌落。

霉菌、酵母菌检验注意事项

1.稀释样品时用无菌水。

2.3天观察时把所有的酵母菌做标记。

3.如果有霉菌被培养出，请不要把皿盖随便打开，待培养物高压灭菌后再清洗。

坏包分析注意事项

1.对已开包的酸包胀包要马上转移到无菌瓶中，已防二次污染。

2.根据坏包的不同表现状态适当的选择培养项目。

3.做微生物培养的同时测定感官、理化指标，注意其有何变化。