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{微生物检测}常规鉴定技术

{微生物检测}常规鉴定技术一

(一)形态结构和培养特性观察

1、微生物的形态结构观察主要是通过染色，在显微镜下对其形状、大小、排列方式、细胞结构(包括细胞壁、细胞膜、细胞核、鞭毛、芽孢等)及染色特性进行观察，直观地了解细菌在形态结构上特性，根据不同微生物在形态结构上的不同达到区别、鉴定微生物的目的。有时为了更有效地分离某些yanyangjun，可以把所分离的样品接种于培养基上，然后再把培养皿放在完全密封的厌氧培养装置中。

2、细菌细胞在固体培养基表面形成的细胞群体叫菌落(colony)。不同微生物在某种培养基中生长繁殖，所形成的菌落特征有很大差异，而同一种的细菌在一定条件下，培养特征却有一定稳定性。以此可以对不同微生物加以区别鉴定。接种、培养是食品微生物应用、研究过程中***基本和***的方法。因此，微生物培养特性的观察也是微生物检验鉴别中的一项重要内容。

抑菌效力

接种大肠埃希菌、金黄色球菌、铜绿假单胞菌的新鲜培养物至胰酪胨大豆肉汤培养基中，30～35℃培养18～24小时；接种白色的新鲜培养物至沙氏葡萄糖液体培养基中，20～25℃培养24～48小时。上述培养物用0.9%无菌氯化钠溶液制成每1ml含菌数为50～100cfu的菌悬液。接种黑曲霉的新鲜培养物至沙氏葡萄糖琼脂斜面培养基中，20～25℃培养5～7天，加入3～5ml含0.05%（ml/ml）聚山梨酯80的0.9%无菌氯化钠溶液，将孢子洗脱。然后，采用适宜方法吸出孢子悬液至无菌氯化钠溶液制成每1ml含孢子数50～100cfu的孢子悬液。(1)接种灭菌(2)开启棉塞(3)管口灭菌(4)挑起菌苔(5)接种(6)塞好棉塞。

微生物计数

3.滤膜法

滤膜法是当样品中菌数很低时，可将一定体积的湖水、海水或饮用水灯样品通过膜过滤器。然后将滤膜干燥、染色，并经处理使膜透明，再在显微镜下计算膜上(或一定面积上)的细菌数。

此法也可以通过培养观察形成的菌落数来推算样品中的菌数。例如测定饮用水中大肠gan菌的数目:将已知体积的水过滤后，将滤膜放在伊红美蓝培养基上培养。我们可以创造一些条件只让所需的微生物生长，在这些条件下，所需要的微生物能有效地与其他微生物进行竞争，在生长能力方面远远超过其他微生物。在该培养基上大肠gan菌的菌落呈现黑色，可根据培养基上黑色菌落的数目，计算出水样中大肠gan菌的数目。

此法也是统计样品中活菌的数目。

4.比浊法

原理是在一定范围内，菌是悬液中细胞浓度与混浊度成正比，即与光密度成正比，菌越多，光密度越大。因此可借助与分光光度计，在一定波长下，测定菌悬液的光密度，以光密度表示菌量。实验测量时一定要控制在菌浓度与光密度成正比的线性范围内，否则不准确。

5.显微镜直接计数法

在课本生物选修1生物技术实践P22中“除了上述活菌计数法外，显微镜直接计数也是测定微生物数量的常用方法。”这里说的显微镜直接计数，我认为应该是在稀释涂布的基础上不培养成菌落而通过染色的方法在显微镜下直接计数。含有一种以上的微生物培养物称为混和培养物(mixedculture)。再如滤膜法也一样，可以有两种情况。

另外，微生物计数法发展迅速，多种多样的快速、简易、自动化的仪器和装置等方法可以用来统计微生物的数目。

武汉世纪久海检测技术有限公司可为客户提供的微生物限度技术服务。微生物限度检查法系检查非规定灭菌制剂及其原料、辅料受微生物污染程度的方法。检查项目包括细菌数、霉菌数、酵母菌数及控制菌检查。

服务项目：

1.微生物限度一般做细菌总数，霉菌 &酵母菌，大肠埃希菌等。

2.微生物限度方法开发（样品量 20g/批，一个批次）。

3.微生物限度方法验证(样品量 80g/批，三个批次)。

4.微生物限度测试(3 个批次产品，样品量 40g/批)。