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{微生物检测}常规鉴定技术

——{微生物检测}常规鉴定技术二——

(二)生理生化试验

微生物生化反应：指用化学反应来测定微生物的代谢产物，生化反应常用来鉴别一些在形态和其它方面不易区别的微生物。因此微生物生化反应是微生物分类鉴定中的重要依据之一。

微生物检验中常用的生化反应有：

1、糖酵解试验

不同微生物分解利用糖类的能力有很大差异，或能利用或不能利用，能利用者，或产气或不产气。可用指示剂及发酵管检验。

2、淀粉水解试验

某些细菌可以产生分解淀粉的酶，把淀粉水解为麦芽糖或葡萄糖。淀粉水解后，遇碘不再变蓝色。

3、v-p试验

某些细菌在葡萄糖蛋白胨水培养基中能分解葡萄糖产生丙酸，丙酸缩合，脱羧成乙酰，后者在强碱环境下，被空气中氧氧化为二乙酰，二乙酰与蛋白胨中的胍基生成红色化合物，称v－p(+)反应。

什么是抑菌测试

用于测定抗jun药wu体外抑制细菌生长效力的试验称为抑菌试验。因此，微生物培养特性的观察也是微生物检验鉴别中的一项重要内容。通过抑菌实验，可以测定一个药wu的di抑菌浓度，用以评价该药wu的抑菌性能，这是抗jun药wu的基本的药xiao学数据。主要方法有进行定性测定的扩散法(如抑菌斑试验)和进行定量测定的稀释法(如di抑菌浓度实验)。

抑菌剂效力检查法指导原则

抑菌剂效力检查法系用于测定灭菌、非灭菌制剂中抑菌剂的活性，以评价终产品的抑菌效力，同时也可用于指导生产企业在制剂研发阶段抑菌剂的确定。

微生物限度检查

   （3）MPN法 MPN法的精密度和准确度不及薄膜过滤法和平皿计数法，仅在供试品需氧菌总数没有适宜计数方法的情况下使用，本法不适用于霉菌计数。若使用MPN法，按下列步骤进行。

   取照上述“供试液的制备”“接种和稀释”和“抗jun活性的去除或灭活”制备的供试液至少3个连续稀释级，每一稀释级取3份1ml分别接种至3管装有9～10ml胰酪大豆胨液体培养基中，同法测定菌液对照组菌数。——{微生物检测}常规鉴定技术二——(二)生理生化试验微生物生化反应：指用化学反应来测定微生物的代谢产物，生化反应常用来鉴别一些在形态和其它方面不易区别的微生物。必要时可在培养基中加入表面活性剂、中和剂或灭活剂。

   接种管置30～35℃培养3天，逐日观察各管微生物生长情况。5、涂布接种与浇混接种略有不同，就是先倒好平板，让其凝固，然后再将菌液倒入平板上面，迅速用涂布棒在表面作来回左右的涂布，让菌液均匀分布，就可长出单个的微生物的菌落。如果由于供试品的原因使得结果难以判断，可将该管培养物转种至胰酪大豆胨液体培养基或胰酪大豆胨琼脂培养基，在相同条件下培养1～2 天，观察是否有微生物生长。根据微生物生长的管数从表3查被测供试品每1g或每1ml中需氧菌总数的可能数。

药品微生物限度检测的内容：

1.无菌检查。

2.微生物限度检查。

3.微生物总数检查。

4.控制菌检查（大肠埃希菌、大肠菌群、沙门菌、铜绿假单胞菌、金黄色、梭菌、白色等）。

微生物限度检测条件：

1、检查环境和人员要求

（1）环境要求 : 无菌室内进行。背景洁净度10,000 级下的局部 100 级，单向流空气。

（2）操作人员：卫生、着装符合要求。

（3）操作要求：严格遵守无菌操作，严防污染。

2、方法验证

由于某些供试品具有活性，在建立测定方法或原测定法的检验条件发生改变时，可能影响检验结果的准确性，必须对供试品的抑菌活性及测定方法的可靠性进行验证。

3、正确抽样

（1）抽样方法：

u 随机；

u 优先抽有疑问样品；

u 抽样量：检测用量的 3~5 倍；

（2）检测用量

（3）检测量