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{微生物检测}致病菌

——微生物检测致病菌——

     致病菌即能够引起人们发病的细菌。大肠菌群检验呈阳性，并怀疑食品可能受到致病菌污染时可进行致病菌检验。在我国现有的***中，致病菌一般指'肠道致病菌和致病性球菌'，主要包括沙门氏菌、志贺氏菌、金黄色葡萄qiu菌、致病性链球菌等四种，致病菌不允许在食品中检出。单一细胞经过多次增殖后形成一个菌落，取单个菌落制成悬液，重复上述步骤数次，便可得到纯培养物。

     对不同的食品和不同的场合，应选择一定的参考菌群进行检验。如海产品以副溶血性弧菌作为参考菌群，蛋与蛋制品以沙门氏菌菌、金黄色葡萄qiu菌、变形gan菌等作为参考菌群，米、面类食品以蜡样芽孢gan菌、变形gan菌、霉菌等作为参考菌群，罐头食品以耐热性芽孢菌作为参考菌群等。微生物检验中常用的生化反应有：1、糖酵解试验不同微生物分解利用糖类的能力有很大差异，或能利用或不能利用，能利用者，或产气或不产气。

抑菌效力

黑曲霉菌悬液：操作时关闭空调系统及洁净工作台风机。接种黑曲霉的新鲜培养物至沙氏葡萄糖琼脂培养基中，23～28℃培养5～7天，加入3～5ml含0.05%（ml/ml）聚山梨酯80的0.9%无菌氯化钠溶液，将孢子洗脱，然后，用适宜方法吸出孢子悬液至无菌试管内，用含0.05%（ml/ml）聚山梨酯80的0.9%无菌氯化钠溶液稀释至           ，用比浊法制成每1ml含孢子数108cfu的孢子悬液。由于其种类繁多、来源广泛、危害巨大，并具有群爆发、宿主范围广、传播速度快和社会影响强烈、控制难度大等特点，是引发食品安全危害的重要因素，严重时会危及人类健康甚至社会安定，造成巨大经济损失。

微生物限度检查

计数方法适用性试验中，采用平皿法或薄膜过滤法时，试验组菌落数减去供试品对照组菌落数的值与菌液对照组菌落数的比值应在0.5～2范围内；一般应随机抽取不少于检验用量(两个以上***xiao包装单位)的3倍量供试品。采用MPN法时，试验组菌数应在菌液对照组菌数的95%置信限内。若各试验菌的回收试验均符合要求，照所用的供试液制备方法及计数方法进行该供试品的需氧菌总数、霉菌和酵母菌总数计数。

   方法适用性确认时，若采用上述方法还存在一株或多株试验菌的回收达不到要求，那么选择回收接近要求的方法和试验条件进行供试品的检查。

   供试品检查

   检验量

   检验量即一次试验所用的供试品量（g、ml或c㎡）。

   一般应随机抽取不少于2个zui小包装的供试品，混合，取规定量供试品进行检验。

   除另有规定外，一般供试品的检验量为10g或10ml；膜剂为100c㎡；贵重药品、微量包装药品的检验量可以酌减。检验时，应从2个以上zui小包装单位中抽取供试品，大蜜丸还不得少于4丸，膜剂还不得少于4片。

   供试品的检查

   按计数方法适用性试验确认的计数方法进行供试品中需氧菌总数、霉菌和酵母菌总数的测定。

   胰酪大豆胨琼脂培养基或胰酪大豆胨液体培养基用于测定需氧菌总数；沙氏葡萄糖琼脂培养基用于测定霉菌和酵母菌总数。

   阴性对照试验 以稀释液代替供试液进行阴性对照试验，阴性对照试验应无菌生长，如果阴性对照有菌生长，应进行偏差调査。

微生物限度检测方法主要包括3种。      

1.微生物计数法：该种检测方法用于能在有氧条件下生长的嗜温细菌和真菌的计数。本法用于检查非无菌制剂及其原、辅料等是否符合相应的微生物限度标准。检验项目分别为：需氧菌、霉菌及酵母菌计数。其中，需氧菌计数方法适用性试验：铜绿假单胞菌、金黄色、枯草芽孢。除另有规定外，本检查法中细菌及控制菌培养温度为30℃~35℃。霉菌及酵母菌计数方法适用性试验：白色、黑曲霉。      

2.控制菌检查法：控制菌检查法系用于在规定的试验条件下，检査供试品中是否存在特定的微生物。分别为培养基适用性检查和控菌检查方法适用性试验。控制菌计数方法适用性试验：耐胆盐革兰阴性菌、大肠埃希氏菌、沙门氏菌、铜绿假单胞菌、金黄色葡萄菌、梭菌、白色。30-2010食品安全标准食品微生物学检验单核细胞***李斯特氏菌检验GB4789。      

3.方法学适用性试验：药品的微生物计数方法应进行方法适用性试验，以确认所采用的方法适合于该产品的微生物计数。